Набір реагентів «Сироватки діагностичні сальмонельозні адсорбовані H-моновалентні для реакції аглютинації» призначений для якісного виявлення, за допомогою реакції аглютинації (РА) на предметному склі, антигенів: a; b; c; d; eh; enz15; enx; f; g; i; h; k; lv; m; gm; p; q; r; st; s; t; u; x; y; w; v; z; z6; z10; z13; z15; z23; z24; z27; z28; z29; z32; z36; z39; z42; z51; 1,2; 1,5; 1,6; 1,7; 2; 5; 6; 7 бактерій роду Salmonella, виділених з біологічного матеріалу людини (сеча, випорожнення, промивні води шлунка, блювотні маси).

Набір реагентів «Сироватки діагностичні сальмонельозні адсорбовані H-моновалентні для реакції аглютинації» призначений для серологічної ідентифікації та підтвердження належності бактерій до роду Salmonella при діагностиці захворювань і виявлення сальмонелоносійства.

Відповідно до серологічної класифікації бактерій роду Salmonella моновалентні H-сироватки містять H-аглютиніни проти відповідних антигенів: a; b; c; d; eh; enz15; enx; f; g; i; h; k; lv; m; gm; p; q; r; st; s; t; u; x; y; w; v; z; z6; z10; z13; z15; z23; z24; z27; z28; z29; z32; z36; z39; z42; z51; 1,2; 1,5; 1,6; 1,7; 2; 5; 6; 7.

 Сальмонельоз - гостра зоонозна інфекційна хвороба з фекально-оральним механізмом передачі збудника, що характеризується переважним ураженням шлунково-кишкового тракту, розвитком інтоксикації і зневоднення.

Сальмонели - грамнегативні палички роду Salmonella сімейства Enterobacteriaceae. Виділяють два види сальмонел - S. enterica і S. bongori (не патогенні для людини).

У практичній роботі для серологічної ідентифікації сальмонел проводять дослідження з О,Н - і Vi-антигенів. Відповідно до класифікації Кауфмана-Уайта по О-антигену визначають серологічні О-групи сальмонел, що позначаються буквами - А, В, С, D і т.д., по Н-антигену ідентифікують серовар збудників. До теперішнього часу виділено 67 О-груп сальмонел і більше 2,5 тис сероварів по Н-антигену. У переважній більшості (85-91%) випадків сальмонеллезной інфекції від людей ізолюють серовар підвиду enterica: S. typhimurium, S. enteritidis, S. раnаmа, S. infantis, S. newport, S. agona, S. derby, S. london та ін. Клінічні прояви, викликані різними серотипами сальмонел, суттєво не відрізняються один від одного, тому в даний час не позначався в діагнозі "сальмонельоз групи D" або "сальмонельоз С", а вказують лише клінічну форму хвороби і серотип виділеної сальмонели, що має значення для виявлення джерела інфекції.

Основним методом для підтвердження наявності сальмонел є бактеріологічний (виділення і ідентифікація збудника за допомогою поживних середовищ, біохімічних тестів, серологічних досліджень). Матеріалом для досліджень можуть служити випорожнення, блювотні маси, промивні води шлунка, а при необхідності сеча, кров, жовч і інші виділення з уражених органів хворих. В особливих випадках (спалаху сальмонельозів) діагноз може бути поставлений на основі клініко-епідеміологічних даних з додатковими позитивними результатами серологічних (РПГА, ІФА, РНГА) і молекулярно-генетичних (ПЛР) досліджень.

Серологічну ідентифікацію сальмонел починають з випробування їх в реакції аглютинації (РА) на склі з аглютиниуючою адсорбированною полівалентною сироваткою до сальмонел груп (А, В, С, Д, Е), а в разі отримання негативного результату з аглютиниуючою адсорбированною полівалентною сироваткою до сальмонел рідкісних груп. При отриманні позитивних результатів аглютинації з сумішшю О-сироваток, культуру досліджують з кожною О-сироваткою, що входить в суміш. Після встановлення приналежності культури до однієї з О-груп, визначають наявність додаткових О-антигенів, властивих представникам зазначеної групи. Після цього проводять реакцію аглютинації з Н-сироватками. При цьому спочатку використовують Н-сироватки, відповідні Н-антигенів 1 фази, а потім Н-антигенів 2 фази. Починають з Н-сироваток, відповідних більш поширеним сероварам даної групи.

Набір випускається в 50 варіантах комплектації, 2 видів (суха і рідка), по 2,0 мл сироватки у флаконі; 1 флакон одного найменування:

Комплект №1 Сальмонельозна моновалентна сироватка, набір

Комплект №1/1 Сальмонельозна моновалентна сироватка набір H-a; H-b; H-c; H-d; H-eh; H-enz₁₅; H-enx; H-f; H-g; H-i; H-h; H-k; H-lv; H-m; H-gm; H-p; H-q; H-r; H-st; H-s; H-t; H-u; H-x; H-y; H-w; H-v; H-z; H-z₆; H-z₁₀; H-z₁₃; H-z₁₅; H-z₂₃; H-z₂₄; H-z₂₇; H-z₂₈; H-z₂₉; H-z₃₂; H-z₃₆; H-z₃₉; H-z₄₂; H-z₅₁; H-1,2; H-1,5; H-1,6; H-1,7; H-2; H-5; H-6; H-7 (суха)

Комплект №1/2 Сальмонельозна моновалентна сироватка, набір H-a; H-b; H-c; H-d; H-eh; H-enz₁₅; H-enx; H-f; H-g; H-i; H-h; H-k; H-lv; H-m; H-gm; H-p; H-q; H-r; H-st; H-s; H-t; H-u; H-x; H-y; H-w; H-v; H-z; H-z₆; H-z₁₀; H-z₁₃; H-z₁₅; H-z₂₃; H-z₂₄; H-z₂₇; H-z₂₈; H-z₂₉; H-z₃₂; H-z₃₆; H-z₃₉; H-z₄₂; H-z₅₁; H-1,2; H-1,5; H-1,6; H-1,7; H-2; H-5; H-6; H-7 (рідка)

СПОСІБ ЗАСТОСУВАННЯ

Устаткування і матеріали (для «ручної» постановки)

секундомір;

Холодильна камера з температурним режимом 2-8 ° С;

Піпетки напівавтоматичні з робочими діапазонами: 5-50 мкл, 20-200 мкл;

Одноразові наконечники до вказаних піпетки;

Контейнери для рідких і твердих відходів;

Гумові або латексні рукавички, засоби дезінфекції;

Петля бактеріологічна;

Скло предметні;

Лупа зі збільшенням (2х);

0,9% розчин хлористого натрію;

Термостат сухоповітряний, що підтримує температуру (37 ± 1) ° С;

70% розчин спирту етилового і 6% розчин перекису водню (дез. Розчини) або розчини інших дезінфектантів, дозволених до застосування СП 1.32322-08.

Постановка РА на склі

Перед початком роботи витримати всі реагенти перед проведенням аналізу при температурі від 18 до 25 ° С.

Суху сироватку розчиняють в 2 мл 0,9% водного розчину хлористого натрію.

На предметне скло наносять одну краплю (близько 40 мкл) сироватки і одну краплю 0,9% водного розчину хлористого натрію.

Ідентифікований зразок, що містить антиген, вирощений в пробірках на скошеному поживному агарі протягом 18-20 год. при температурі 37 °С, знімають з нижньої частини агару петлею, наносять на предметне скло поблизу краплі 0,9% водного розчину хлористого натрію і емульгують (контроль на відсутність спонтанної аглютинації).

 При відсутності спонтанної аглютинації маніпуляцію повторюють в краплі H-сироватки, формуючи рівномірну непрозору суспензію.

Облік результатів проводять протягом 2-3 хвилин, м'яко похитуючи скло.

Гомогенна суспензія свідчить про негативний результат. При наявності аглютинінів до досліджуваного штаму в краплі сироватки протягом 2-3 хв з'являється пластівчастий аглютинат.

Облік результат РА проводять візуально за допомогою лупи із збільшенням (2х) по четирехкрестной системі

Результати РА враховуються і оцінюються наступним чином:

++++ - виразний аглютинат при повному просвітлінні рідини в краплі (100%);

+++ - виразний аглютинат на тлі мутнуватої рідини (75%);

++ - незначний аглютинат на тлі каламутної рідини (50%);

+ - сліди аглютинату, рідина в краплі каламутна (25%);

(-) - негативний результат, гомогенно каламутна рідина в краплі (0%).

РА з діагностичною сироваткою враховується тільки при негативному результаті контролю спонтанної аглютинації.

Ідентифікований зразок, що містить антиген, відносять до відповідної H-групи, якщо на склі отримана РА з пуловою сироваткою цієї групи не нижче ніж на (+++).

ТЕРМІН ПРИДАТНОСТІ

Сальмонельозна пулова H-сироватка, суха - 5 років з дня прийняття ОБТК підприємства- виробника.

Сальмонельозна пулов