Анти сироватка E. coliII полівалентна (O86:K61,O124:K72,O125:K70,O126:K71,O127:K63,O128:K67) Анти сироватка E. coliIII полівалентна (O18aO18c:K77, O20aO20b:K84,O28:K73,O112aO112c:K66)
МЕТОДИКА ВИКОРИСТАННЯ:
Негативний контроль: негативний контроль проводиться на початку серотипування з метою виключення спонтанної аглютинації. Для цього використовують фізіологічний
розчин (0,9% NaCl) замість сироваток. Невелику кількість досліджуваної бактеріальної
маси слід змішати з краплею фізіологічного розчину на предметному склі. Оцінити
отриману суспензію протягом однієї хвилини. Якщо суспензія залишається
молочно-каламутною, або якщо реакція починається тільки після похитування
предметного скла вперед-назад більше ніж 20 разів,
результат є негативним, що є підставою для проведення реакції аглютинації досліджуваної
культури з аглютинуючими діагностичними сироватками.
Слайд-аглютинація живих організмів:
Культури, підозрілі як патогенні E.coli за морфологічними, культуральними та біохімічними ознаками, досліджують у реакції аглютинації на склі спочатку із полівалентними сироватками Антисироватка E. coli I полівалентна, Анти сироватка E. coli II полівалентна та Антисироватка E. coli III полівалентназа наступним алгоритмом:
1. Нанесіть 1 краплю (близько 25 мкл)Антисироватки E. coli I полівалентна на досліджувану ділянку чистого предметного скла.
2. Використовуючи бактеріальну петлю, перенесіть невелику кількість бактеріальної маси на предметне скло та змішайте з однією краплею діагностичної сироватки до утворення гомогенної,
злегка «молочної» суспензії.
3. Похитуйте предметне скло вперед-назад протягом
однієї хвилини.
4. Оцініть результат:
Позитивний результат реакції слайд-аглютинації: видима аглютинація (великі чи дрібні аглютинини у
вигляді пластівців) після похитування проби вперед-назад менше 20 разів.
Слабопозитивний результат реакції слайд-аглютинації: аглютинація відбувається тільки після похитування
предметного скла вперед-назад 10-20 разів.
Негативний результат реакції слайд-аглютинації: суспензія залишається молочно-каламутною, або якщо реакція
починається тільки після похитування предметного скла вперед-назад більше ніж
20 разів.
Проведіть РА з полівалентними сироватками Анти сироватка E. coli II
полівалентна та Антисироватка E. coli III полівалентна за
алгоритмом, що описаний вище. Оцініть
результат. Якщо живі мікроорганізми не дали позитивного результату РА, змішайте
2 петлі культури з 1 мл фізіологічного розчину, потім прогрівайте при 100oC
на водяній бані впродовж 1 години. Повторіть тест аглютинації, як описано вище.
Оцініть результат. При позитивній або слабо позитивній РА з однією з
полівалентних сироваток продовжують серологічну ідентифікацію культури з
адсорбованими сироватками, що входять у склад полівалентної, за тим же самим
алгоритмом.
Якщо результат РА позитивний з Антисироваткою
E. coli I полівалентна, тоді слід проводити тестування з моновалентними
сироватками, які входять в її склад, а
саме:
O25 : K11
O26 : K60
O44 : K74
O55 : K59
O78 : K80
O111 : K58
O114 : K-
O119 : K69 Якщо результат РА позитивний з Антисироваткою
E. coli II полівалентна, тоді слід
проводити тестування з моновалентними сироватками, які входять в її склад, а саме:
O86 : K61
O124 : K72
O125 : K70
O126 : K71
O127 : K63
O128 : K67 Якщо
результат РА позитивний
з Антисироваткою E. coli IIІ полівалентна, тоді слід проводити тестування з моновалентними сироватками, які входять
в її склад, а саме:
O18 : K77
O20 : K84
O28 : K73
O112 : K66
Після визначення до якої антигенної групи
належить виділена культура, потрібно підтвердження позитивного результату за
допомогою аглютинації на предметному склі з термічно вбитими мікроорганізмами.
Слайд-аглютинація загиблих від нагрівання
організмів
Якщо живі культури
дають позитивну реакцію аглютинації з моно валентною сироваткою, змішайте 2
петлі культури з 1 мл фізіологічного розчину, потім прогрівайте при 100oC
на водяній бані впродовж 1 години.
