НАБІР РЕАКТИВІВ ДЛЯ ВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ АЛАНІНАМІНОТРАНСФЕРАЗИ У СИРОВАТЦІ КРОВІ (МЕТОДРАЙТМАНА-ФРЕНКЕЛЯ), АлАТ

ПРИЗНАЧЕННЯ

Набір використовується для визначення активності аланінамінотрансферази у сироватці крові людини в клініко-діагностичних, біохімічних лабораторіях та науково- дослідницькій практиці.

Набір  розрахований  на  60  макро-,  125  напівмікро-  або  250  мікровизначень (з урахуванням холостих проб) 

Лінійність   повинна   забезпечуватись  в   діапазоні  від   0,1 мкмоль/(год´мл)  до

2,5 мкмоль/(год´мл) (від 0,028 мккат/л до 0,7 мккат/л).

Коефіцієнт варіації визначення - не більше 6 %.

Зберігання набору - при температурі від плюс 2 °С до плюс 8 °С.

Гарантійний термін придатності набору – 12 місяців від дня виготовлення. Набір призначений для застосування in vitro професійно навченим лаборантом.

ПРИНЦИП МЕТОДУ

Внаслідок амінування 2-оксоглутарової кислоти L-аланіном, яке відбувається під дією аланінамінотрансферази, утворюються L-глутамінова та піровиноградна кислоти. Визначення базується на вимірюванні оптичної щільності 2,4-дінітрофенілгідразонів 2-оксоглутарової та піровиноградної кислот в лужному середовищі. Оскільки гідразон піровиноградної кислоти має більш високий коефіцієнт молярної екстинції, то спостерігається прямо пропорційна залежність оптичної щільності реакційного розчину від активності фермента.

СКЛАД НАБОРУ

1.      Субстратно-буферний розчин АлАТ                          – 1 флакон з (50 ± 2) мл;

-                фосфатний буфер (0,100 ± 0,005) моль/л,

-                D,L-альфа-аланін (0,20 ± 0,01) моль/л,

-                2-оксоглутарова кислота (2,0 ± 0,1) ммоль/л.

2.      Стоп-реагент                                                                – 1 флакон з (50 ± 2) мл;

-                2,4-дінітрофенілгідразин (1,00 ± 0,05) ммоль/л

3.      Калібрувальний розчин                                              – 1 ампула з (5,0 ± 0,5) мл;

-                піровинограднокислого натрію (2,0 ± 0,1) ммоль/л,

(220 ± 11) мкг/мл, (що відповідає 176 мкг/мл піровиноградної кислоти)

4.      Гідроокис натрію розчин (4,0 ± 0,2) моль/л чи сухий         – 1 флакон з (50 ± 2) мл (ОБЕРЕЖНО, ЇДКА РЕЧОВИНА!)                 або з (8,00 ± 0,32) г.

ДІАГНОСТИЧНІ ХАРАКТЕРИСТИКИ

Амінотрансферази каталізують утворення глутаминової кислоти з 2-оксoглутарата шляхом перенесення аміногруп.

У нормі АлАТ присутній в багатьох тканинах, але найбільші концентрації визначаються в печінці і нирках.

Рівень сироваткової АлАТ підвищується при гепатиті та інших захворюваннях печінки, що супроводжуються некрозом гепатоцитів: інфекційному мононуклеозі, холестазі, цирозі, метастатичній карциномі печінки, білій лихоманці і при призначенні різних лікарських засобів, таких як опіати, саліцилати або ампіцилін ^2,3.

Клінічний діагноз повинен встановлюватися на основі інтеграції клінічних і лабораторних даних.

КОНТРОЛЬ ЯКОСТІ

Для контролю ходу реакції і процедури вимірювання рекомендується використовувати контрольні сироватки зі значеннями, визначеними даним методом. Наприклад: «Ліонорм» (Чехія), «Біоконт С» (Росія), ”ФілоНорм” або „ФілоПат” (Україна).

Кожна лабораторія повинна встановити власну внутрішню систему контролю якості.

ПРИМІТКИ

1.      Для приготування реактивів застосовується дистильована вода, яка не містить карбонатів.

2.      Якщо величина екстинції вище 0,25 од.опт.  щільності, сироватку слід розбавити в  10 разів якою-небудь інактивованою сироваткою, або 5% розчином альбуміну, що готується на фізіологічному розчині. Результат множать на коефіцієнт розведення (10).

3.      Пробірки, в яких проводиться аналіз, повинні бути ретельно вимиті дистильованою водою від залишків миючих засобів і водопровідної води. У противному випадку, можливо одержання негативних (оптична щільність дослідної проби нижче контрольної) або занижених результатів.

4.      Для кожної нової серії реагентів треба побудувати новий калібрувальний графік.

5.      Розраховано на загальний об’єм реакційної суміші: 4,88 мл (макро-), 2,44 мл (напівмікро-), 1,22 мл (мікро-). Витрату реактивів можна масштабувати, відповідно до аспіраційного об'єму кювети аналізатора, виходячи з постійного співвідношення:

Термін постачання: 5 р. д.
Інформація актуальна: 03.02.2018