Сифилис-VDRL-тест

Набор реагентов для выявления антител к Treponema pallidum

в реакции микропреципитации на стекле

Для качественного и полуколичественного определения антител к Treponema pallidum в сыворотке (плазме) крови и спинномозговой жидкости (СМЖ) человека с помощью реакции микропреципитации (РМП) на стекле.

ПРИНЦИП МЕТОДА

Антитела-реагины (антитела классов M и G к липопротеиновому антигену Treponema pallidum) появляются в сыворотке крови больных сифилитической инфекцией через 6-8 недель после заражения или через 3-4 недели после появления первичного аффекта; в спинномозговой жидкости - при специфическом поражении оболочек и ткани мозга.

Исследование образцов биологического материала больных сифилисом проводится на стеклянных слайдах или предметных стеклах в РМП с VDRL-антигеном (антигеном Venereal Disease Research Laboratory – липидным комплексом, аналогичным липопротеиновому антигену Treponema pallidum). Наличие реагиновых антител выявляется по образованию мелких преципитатов, учет результатов исследования осуществляется визуально.

АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

1.           Диагностическая чувствительность теста при первичном сифилисе – 78%, при вторичном сифилисе - 100%, при поздних формах сифилитической инфекции - 70-94%.

2.           Диагностическая специфичность при всех клинических формах – 98%.

3.           Набор рассчитан на исследование 1000 образцов, включая контрольные.

ПРОВЕДЕНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Качественное исследование

1. Реагенты и анализируемые пробы выдержать при температуре от 18 до 25 ^оС не менее 15 мин. При более низкой температуре реагентов чувствительность теста может снижаться.

2. На предметное стекло (стеклянный слайд) нанести (отдельными каплями) по 50 мкл исследуемой пробы, 50 мкл К⁺ и 50 мкл К^–, каждую каплю распределить кончиком пипетки по кругу диаметром 14-15 мм.

3. Осторожно легким вращением перемешать суспензию VDRL-антигена и внести по 20 мкл ее в каждую каплю исследуемой пробы, К⁺ и К^–.

4. Поместить предметное стекло (слайд) на шейкер с частотой вращения 180 об/мин и выдержать 4 мин, после чего немедленно учесть результаты реакции.

Внимание! Задержка с учетом результатов может привести к ложноположительной реакции.

Учет и интерпретация результатов реакции

Предметное стекло (слайд) просмотреть под световым микроскопом (увеличение х100), оценивая наличие (отсутствие) и величину агрегатов в пробах (каплях).

При наличии больших и средних агрегатов на прозрачном фоне результат исследования оценивают как сильно положительный (4+).

При наличии небольших агрегатов и мелких структур на просветленном фоне результат исследования оценивают как положительный (3+).

При наличии мелких структур серого цвета на фоне более светлых частиц суспензии результат исследования оценивают как слабо положительный. (2+).

При отсутствии агрегатов в реакционной смеси результат исследования оценивают как отрицательный.

Результаты реакции с исследуемыми образцами учитывать только при условии получения положительных результатов с К⁺ и отрицательных результатов с К^–.

Полуколичественное исследование (определение титра реагинов)

Титр реагинов определяется только в образцах, показавших положительные или слабоположительные результаты в качественном исследовании.

1.           Используя планшет для микротитрования, приготовить:

·       разведения К⁺ в физиологическом растворе до титра, указанного на этикетке.

·       разведения исследуемой пробы в физиологическом растворе: 1:2; 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 и так далее.

2.           Каждое разведение исследовать так же, как и при качественном определении реагиновых антител.

Титром реагинов в исследуемом образце считать максимальное разведение, с которым получен положительный или слабоположительный результат, при условии отрицательного результата с последующим разведением.

Титр реагинов в исследуемом образце учитывать только при условии положительного или слабоположительного результата с разведением К⁺, соответствующем титру, указанному на этикете. В противном случае исследование необходимо повторить.

При получении положительного результата с максимальным из использованных разведений исследуемого образца, для определения титра реагинов в нем ряд разведений образца необходимо продолжить.

 Внимание!

Поскольку VDRL-тест по характеру используемого антигена является нетрепонемным методом исследования, все образцы, показавшие положительные результаты в реакции с VDRL-антигеном, с целью диагностики сифилитической инфекции должны быть дополнительно исследованы в трепонемных тестах, таких как ИФА, РПГА и (или) РИФ.

Отрицательные результаты исследования в VDRL-тесте не исключают наличия сифилитической инфекции.

Возможно получение ложноположительных результатов исследования в VDRL-тесте при инфекционном мононуклеозе, вирусной пневмонии, токсоплазмозе, беременности и аутоиммунных заболеваниях.

СРОК ГОДНОСТИ

Срок годности набора – 1,5 года. Набор с истекшим сроком годности применению не подлежит.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВАНИЯ

Хранение

В упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8^оС. Замораживание не допускается.

Транспортирование

При температуре от 2 до 8^оС. Замораживание не допускается. Допускается транспортирование при температуре от 9 до 25^оС в течение 10 сут.