Клиника-Кал
1. Назначение
Набор реагентов предназначен для определения в кале скрытой крови, стеркобилина, билирубина и приготовления препаратов для микроскопического исследования в клинико-диагностических лабораториях.
Набор рассчитан на 1000 определений скрытой крови, 50 определений стеркобилина, 200 определений билирубина и на приготовление 2000 препаратов для микроскопического анализа кала.
2. Характеристика набора
2.1. Принцип метода
Определение скрытой крови
В присутствии гемоглобина крови бензидин в течение первых двух минут реагирует с перекисью водорода с образованием соединений, окрашенных в зеленый, сине-зеленый или синий цвет. Интенсивность окраски пропорциональна количеству крови в кале.
Определение стеркобилина
Стеркобилин взаимодействуя с уксуснокислым цинком, в присутствии раствора Люголя, образует соединенения, дающие зеленую флюоресценцию.
Определение билирубина
Билирубин под действием реактива Фуше превращается в зеленый биливердин;
интенсивность окраски пропорциональна количеству билирубина в кале.
Микроскопический анализ
- выявление нейтральных жиров и капель жирных кислот.
Под воздействием судана III капли нейтральных жиров и капли жирных кислот окрашиваются в красный или оранжевый цвет.
- дифференциация капель жирных кислот от капель нейтрального жира.
Раствор метиленового синего 0,5 % окрашивает капли жирных кислот в синий или голубой цвет. капли нейтрального жира не окрашиваются.
- дифференциация кристаллов и глыбок жирных кислот от мыл.
Подогревание нативного неокрашенного препарата приводит к сплавлению в капли кристаллов и глыбок жирных кислот. Глыбки и кристаллы мыл в капли не сплавляются.
- выявление мыл.
Под воздействием уксусной кислоты мыла расщепляются с освобождением жирных кислот, которые при нагревании плавятся, образуя капли.
- обнаружение крахмала и йодофильной флоры.
Раствор Люголя окрашивает крахмал, в зависимости от стадии его переваривания в иссиня-черный, фиолетовый или красно-бурый цвет. Йодофильная флора нормальная и патологическая окрашивается йодом в черный или коричневый цвет за счет содержащейся внутриклеточно гранулезы. Цисты простейших окрашиваются в желтый цвет.
- выявление яиц гельминтов.
Глицерин «просветляет» препарат, очищая от бактерий и калового детрита яйца гельминтов.
Такие элементы кала, как мышечные волокна, растительную клетчатку, лейкоциты, эритроциты, кишечный эпителий, слизь, яйца гильминтов, паразитирующие в кишечнике простейшие, микроорганизмы, кристаллы и др. можно обнаружить путем микроскопирования нативного неокрашенного препарата.
2.2. Состав набора
Бензидин – 1 флакон (1,0 г).
Кислота уксусная, 50% – 1 флакон (100 мл).
Гидроперит, таблетки – 1 упаковка (6 шт).
Цинк уксуснокислый, 100 г/л – 1 флакон (100 мл).
Раствор Люголя – 1 флакон (50 мл).
Реактив Фуше – 1 флакон (100 мл).
Кислота уксусная, 30% – 1 флакон (100 мл).
Судан III, 2 % – 1 флакон (100 мл).
Метиленовый синий, 2% – 1 флакон (20 мл).
Глицерин – 1 флакон (130 г).
3. Аналитические и диагностические характеристики набора
Определение скрытой крови.
Норма: реакция на кровь отрицательная.
Определение стеркобилина
Норма: 40-280 мг/сут
Определение билирубина
Норма: обнаруживается только до 3-х месячного возраста.
4. Меры предосторожности при работе с набором
Потенциальный риск применения набора – класс 1.
В состав набора входят бензидин, уксусная и трихлоруксусная кислоты, судан III, метиленовый синий. При работе с ними следует соблюдать осторожность и не допускать попадания на кожу и слизистые; при попадании немедленно промыть пораженное место большим количеством проточной воды. При проглатывании следует выпить 0,5 л теплой воды и вызвать рвоту.
При работе с набором следует надевать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки.
5. Оборудование, материалы и реагенты:
- Флакон из темного стекла вместимостью 10 мл;
- пипетка, позволяющая отбирать 5 мл;
- колбы конические с притертой пробкой вместимостью 100 мл;
- колба мерная вместимостью 200 мл;
-цилиндр мерный вместимостью 100 мл;
- кювета эмалированная или белая керамическая плитка;
- пипетки глазные;
- палочки стеклянные;
- стекла предметные;
- стекла покровные;
- пробирки химические стеклянные вместимостью 10 мл;
- бумага фильтровальная лабораторная;
- воронки химические;
- ступка фарфоровая с пестиком;
-пробирки центрифужные;
- микроскоп;
- секундомер;
- спиртовка;
- вода дистиллированная;
- раствор натрия хлористого 154 ммоль/л;
-перчатки резиновые или пластиковые.
6. Анализируемые пробы
Кал, эмульсия кала
Приготовление эмульсии кала (при плотной или неоднородной консистенции каловых масс)
Кусочек кала помещают в фарфоровую ступку и растирают в небольшом количестве дистиллированной воды или раствора хлорида натрия 154 ммоль/л до консистенции жидкой кашицы. Можно воспользоваться центрифужной пробиркой и стеклянной палочкой.
7. Проведение анализа
7.1. Приготовление рабочих растворов реагентов
7.1.1. Приготовление раствора бензидина.
Около 0,05 г бензидина (на кончике шпателя) внести во флакон из темного стекла вместимостью 10 мл, добавить 5 мл раствора уксусной кислоты, 50 % и тщательно перемешать до полного растворения.
Раствор бензидина готовят непосредственно перед применением; хранению не подлежит.
7.1.2. Приготовление раствора перекиси водорода, 3 %.
В колбу коническую вместимостью 100 мл внести 4,5 г гидроперита (3 таблетки), добавить 50 мл дистиллированной воды, и тщательно перемешать до полного растворения.
Раствор перекиси водорода можно хранить при температуре (2-8)°С в защищённом от света месте не более 3 месяцев.
7.1.3. Цинк уксуснокислый.
Готов к применению. Перед применением взболтать. После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре (18-25)°С в плотно закрытом флаконе не более 1 года.
7.1.4. Приготовление рабочего раствора Люголя
Раствор Люголя разбавить водой дистиллированной в соотношении 1:1.
Рабочий раствор Люголя можно хранить при комнатной температуре в защищённом от света месте не более 6 месяцев.
7.1.5. Реактив Фуше
Готов к применению. Перед применением взболтать.
После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре в плотно закрытом флаконе не более 1 года.
7.1.6. Судан III, 2 %
Готов к применению.
После вскрытия флакона раствор можно хранить при комнатной температуре в плотно закрытом флаконе не более 1 года.
7.1.7. Приготовление раствора метиленового синего, 0,5 %.
Раствор метиленового синего, 2 % разбавить дистиллированной водой в соотношении 1:3.
Раствор метиленового синего, 0,5 % можно хранить при комнатной температуре в плотно закрытом флаконе не более 1 года.
7.1.8. Глицерин
Готов к применению.
После вскрытия флакона можно хранить при комнатной температуре (18-25)°С в плотно закрытом флаконе не более 1 года.
7.2. Проведение анализа
7.2.1. Определение скрытой крови
Кал стеклянной палочкой нанести в виде мазка на предметное стекло (или взять 2-3 капли эмульсии кала). Стекло с нанесенным материалом поместить в белую эмалированную кювету или на белую керамическую плитку.
К препарату добавить 2-3 капли раствора бензидина и 2-3 капли раствора перекиси водорода, 3% и перемешать стеклянной палочкой.
7.2.2. Определение стеркобилина
Эмульсию кала внести в пробирку в количестве 1,0-2,0 мл, добавить равное количество (предварительно взболтанного) спиртового раствора уксуснокислого цинка и 1 каплю рабочего раствора Люголя. Полученную смесь профильтровать в стеклянную пробирку.
7.2.3. Определение билирубина
Эмульсию кала налить по 1,0-2 мл в 2 пробирки (опыт и контроль). В опытную пробирку добавить по каплям реактив Фуше (объем добавляемого реактива не должен быть больше объема эмульсии кала).
Примечание. При проведении анализа обе пробирки держать в руке. Сравнивать окраску в опытной пробирке с контрольной в проходящем свете.
7.2.4. Микроскопическое исследование
Для микроскопического исследования кала готовят 6 препаратов:
- нативный неокрашенный препарат;
- препарат с суданом III;
- препарат с метиленовым синим;
- препарат с 30% раствором уксусной кислоты;
- препарат с раствором Люголя;
- препарат с глицерином.
При приготовлении каждого из них на предметное стекло стеклянной палочкой наносят 1-2 капли эмульсии кала или жидкой каловой массы, в препараты 2-6 вносят по 1-2 капли соответствующего реактива. При этом каплю эмульсии краем покровного стекла смешивают с каплей реактива, затем покрывают покровным стеклом и рассматривают сначала под малым (8х10), а затем под большим (40х10) увеличением.
При неоднородности каловых масс препараты следует готовить из макроскопически видимых плотных частиц и из жидкой части.
8. Регистрация результатов
При определении скрытой крови, стеркобилина, билирубина результат регистрируют визуально. При микроскопическом исследовании результат регистрируют визуально, с помощью микроскопа.
9. Учет результатов
9.1 Определение скрытой крови
Появление зелёного, сине-зелёного или синего окрашивания в течение первых 2 минут после смешивания реагентов указывает на наличие в кале крови (положительная реакция). Появление окраски в более позднее время не учитывается (отрицательная реакция).
9.2. Определение стеркобилина
При наличии стеркобилина (положительная реакция) фильтрат дает зелёную флюоресценцию, которая видна на тёмном фоне.
9.3. Определение билирубина
В присутствии билирубина появляется зелёное или зеленоватое окрашивание (положительная реакция).
9.4. Микроскопическое исследование
Нативный неокрашенный препарат
В нативном препарате можно обнаружить большинство элементов кала: мышечные волокна (переваренные, непереваренные и слабопереваренные), растительную клетчатку (переваримую и непереваримую) нейтральный жир в виде бесцветных капель, жирные кислоты в виде капель, игольчатых кристаллов и глыбок, мыла – в виде кристаллов, игл и глыбок, лейкоциты, эритроциты, кишечный эпителий, слизь, яйца гельминтов, паразитирующие в кишечнике простейшие, микроорганизмы, кристаллы. Для получения достоверного результата исследования при обнаружении в нативном неокрашенном препарате любых видов жиров и яиц гельминтов необходимы дополнительные исследования.
Препарат с суданом III
Капли нейтральных жиров и капли жирных кислот окрашены в красный или оранжевый цвет, а кристаллы и глыбки жирных кислот и мыла не окрашиваются
Препарат с метиленовым синим
Капли жирных кислот окрашены в синий или голубой цвет, капли нейтрального жира не окрашиваются.
Проба с нагреванием
Дифференцирует жирные кислоты от мыл. Нативный неокрашенный препарат подогревают (не доводя до кипения) и тотчас микроскопируют. Кристаллы и глыбки жирных кислот сплавляются в капли (вновь переходящие в глыбки при охлаждении), глыбки и кристаллы мыл в капли не сплавляются. Для постановки пробы может быть также использован препарат с метиленовым синим.
Препарат с раствором уксусной кислоты, 30 %.
Глыбки и кристаллы мыл сплавляются в капли после нагрева (до кипения) препарата с уксусной кислотой.
Препарат с раствором Люголя
Крахмал, расположенный внутри- и внеклеточно на разных стадиях переваривания окрашивается в иссиня-черный, фиолетовый или красно-бурый цвета. Йодофильная флора нормальная и патологическая окрашивается йодом в черный или коричневый цвет. Цисты простейших окрашиваются в желтый цвет и в крупных формах хорошо видны ядра, более четко видны яйца гельминтов.
Препарат с глицерином
В очищенном от бактерий и калового детрита препарате можно обнаружить яйца гельминтов и установить их принадлежность. При обнаружении яиц гельминтов необходимо проведение специального гельминтологического исследования.
10. Условия хранения и эксплуатации набора
Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при комнатной температуре (18-25)˚С в течение всего срока годности.
Срок годности - 1 год.
Компоненты набора после вскрытия флаконов можно хранить при комнатной температуре в плотно закрытых флаконах в течение срока годности набора.
Раствор бензидина готовят непосредственно перед применением; хранению не подлежит.
Раствор перекиси водорода можно хранить при температуре (2-8)˚С в защищённом от света месте не более 3 месяцев.
Рабочий раствор Люголя можно хранить при комнатной температуре (18-25) ˚С в защищённом от света месте не более 6 месяцев.
Рекомендуемые товары
Метод Като
Метод Като1. НазначениеНабор реагентов предназначен для обнаружения в фекалиях гельминтов и их яиц в..
2000.00 грн
Плазма кроличья цитратная сухая уп 10 фл по 1 мл
Препарат представляет собой лиофилизированную плазму кроличью цитратную, полученную из крови кролико..
900.00 грн
Индол тест полоски
Индол тест полоскиНАЗНАЧЕНИЕОпределение индола положительных микроорганизмов.СОСТАВ НАБОРАИндол тест..
500.00 грн