Сироватки діагностичні ешеріхіозні ОК для реакції аглютинації-являють собою рідкі або ліофілізовані імунні сироватки, отримані з крові кроликів, гіперімунізованих корпускулярним антигенами Escherichia coli серотипів: О1: К1, О2: К2, О6: К15, О18: К77, О20: К84, О25: К11, О26: К60, О28: К73, О29: К, О32: К, О33: К, О44: К74, О55: К59, О75: К95, О85: К, О86: К61, О111: К58, О114: К90, О115: К, О119: К69, О124: К72, О125: К70, О126: К71, О127: К63, О128: К67, О136: К78, О142: К86, О143: К, О144: К, О152: К, О159: К, О164: К, «408»

Призначення: Серологічна ідентифікація E.Coli по О і К антигенів в реакції аглютинації (РА) на склі.

Аналітичні і діагностичні характеристики

Специфічна активність: сироватки та імуноглобуліни повинні давати позитивну реакцію РА з гомологічними тест-штамами E.coli і давати негативну реакцію з гетерологічними тест-штамами E.coli.

Специфічна активність набору при визначенні на музейних тест штамах E.coli -100%.

Діагностична специфічність набору визначається на музейних тест-штами E.coli як процентний вміст зразків, визначених набором як негативні, і становить понад 97%.

Діагностична чутливість набору визначається на музейних тест-штами E.coli як процентний вміст зразків, визначених набором як позитивні, і становить понад 99%.

Спосіб застосування:

Ідентифікація досліджуваної культури починається з постановки РА на склі з полівалентними сироватками ОК-сироватками.

При позитивній РА з однією з полівалентних сироваток живу культуру далі перевіряють в РА на склі з ОК імуноглобулінами або з типовими ОК-сироватками (в розведенні 1: 5) тих ОК-груп, антитіла до яких містить полівалентна сироватка.

Позитивну РА з імуноглобулінами підтверджують з відповідними адсорбованими О-груповими сироватками в РА на склі з культурою, прогрітій при 100 ° С протягом 30 хвилин і відцентрифуговувати протягом 15 хвилин при 2500-3500 об / хв.

При відсутності ОК-імуноглобулінів визначення ОК-груп E.coli проводять за допомогою ОК-сироваток в РА на склі з живою культурою, а потім в пробіркових при 100С протягом 30 хвилин.

Типові ОК-сироватки

Суху сироватку розчиняють в 1 мл 0,9% водного розчину хлористого натрію і далі розводять їм же в співвідношенні 1: 5. Краплю (близько 50 мкл) розведеної сиворотки наносять на предметне скло.

Ідентифіковану культуру, вирощену в пробірках на скошеному м'ясо-пептонном агарі протягом 18-20 год при температурі 37 °С знімають з поверхні агару поблизу конденсату петлею, наносять на предметне скло поруч з краплею сироватки і поступово, починаючи з краю краплі, розтирають в ній.

При наявності аглютинінов до досліджуваного штаму в краплі сироватки протягом 3 хв з'являється пластівчастий аглютинат.

Контролем служить отримана аналогічним способом суспензія досліджуваної культури в 0,9% розчині натрію хлористого.

Облік та інтерпретація результатів

Результати РА враховуються візуально і оцінюються наступним чином:

Результати РА враховуються візуально і оцінюються наступним чином:

4 (+) - крупнохлопчатий добре виражений аглютинат, повністю прозора рідина в краплі.

3 (+) - крупнохлопчатий добре виражений аглютинат, рідина в краплі в повному обсязі прозора.

2 (+) - аглютинат слабо виражений, рідина в краплі каламутна.

1 (+) - сліди аглютинату, рідина в краплі каламутна.

(-) - негативний результат, гомогенно каламутна рідина в краплі.

РА з діагностичною сироваткою враховується тільки при її відсутності в контролі.

Досліджувану культуру відносять до відповідного серотипу, якщо на склі отримана РА з сироваткою цього типу не нижче ніж на 3 (+).

У зв'язку з наявністю значної кількості антигенних зв'язків у E.coli різних ОК груп РА на склі є орієнтовною. Остаточну ідентифікцію проводять в розгорнутій РА в пробірках з живою і грітою культурою.

Постановка розгорнутої РА в пробірках

В розгорнутій РА в пробірках сироватки аглютинують живі культури гомологічних ОК груп в розведенні не нижче 1: 200, а прогріті протягом 30 хв на водяній бані при температурі 100 ° С в розведенні не нижче 1 1600; живі культури гетерологичних ОК груп не аглютинують, можлива аглютинація прогрітих гетерологичних культур до титру не вище 1/8 титру гомологічних культур.

Ідентифіковану культуру, вирощену в пробірках на скошеному м'ясо-пептонном агарі протягом 18-20 год при температурі 37 °С, змивають 0,9% розчином хлористого натрію, встановлюють концентрацію мікробної суспензії, відповідаючу10 одиницям за галузевим стандартом мутності (ВЗГ 42- 28-85-08П). Отриману стандартизовану суспензію ділять на дві частини, одну з яких прогрівають 30 хв на водяній бані при 100 °С.

Суху сироватку розчиняють в 1 мл 0,9% водного розчину хлористого натрію і далі розводять їм же в співвідношенні 1:100. З отриманого розведення готують два ряди послідовних дворазових розведень в обсязі 1,0 мл.

У пробірки першого ряду вносять по 0,1 мл трохи рітої (живої) стандартизованої суспензії досліджуваної культури, в пробірки другого ряду - по 0,1 мл прогрітій суспензії.

Контролями служать пробірки, що містять 1,0 мл сироватки в розведенні 1:100 без культури (контроль сироватки) і по 1,0 мл 0,9% розчину натрію хлористого з 0,1 мл живої і грітої культури (контроль культури).

Всі пробірки витримують протягом 18-20 год при 37 °С.

Термін придатності

Термін придатності кожної серії сироваток (імуноглобулінів): сухих - 5 років і рідких 2 роки з дати приймання ОБТК підприємства-виготовлювача

Зберігання та транспортування

Зберігати в упаковці підприємства-виготовлювача при температурі від 2 до 8 С

Транспортування при температурі від 9-25 С сухих сироваток (імуноглобулінів) протягом 14 діб, рідких - протягом 10 діб.

Термін поставки: 5 днів

Інформація актуальна: 07.07.2019