Клініка-Кал

1. Призначення

Набір реагентів призначений для визначення в калі прихованої крові, стеркобіліну, білірубіну та приготування препаратів для мікроскопічного дослідження в клініко-діагностичних лабораторіях.

Набір розрахований на 1000 визначень прихованої крові, 50 визначень стеркобіліну, 200 визначень білірубіну та на приготування 2000 препаратів для мікроскопічного аналізу калу.

2. Характеристика набору

2.1. Принцип методу

Визначення прихованої крові

У присутності гемоглобіну крові бензидин протягом перших двох хвилин реагує з перекисом водню з утворенням сполук, забарвлених зеленим, синьо-зеленим або синім кольором. Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості крові у калі.

Визначення стеркобіліну

Стеркобілін взаємодіючи з оцтовокислим цинком, у присутності розчину Люголя, утворює сполуки, що дають зелену флюоресценцію.

Визначення білірубіну

Білірубін під дією реактиву Фуше перетворюється на зелений білівердин;

Інтенсивність забарвлення пропорційна кількості білірубіну в калі.

Мікроскопічний аналіз

- Виявлення нейтральних жирів і крапель жирних кислот.

Під впливом судану III краплі нейтральних жирів та краплі жирних кислот забарвлюються у червоний чи оранжевий колір.

- диференціація крапель жирних кислот від крапель нейтрального жиру.

Розчин метиленового синього  забарвлює краплі жирних кислот у синій або блакитний колір. краплі нейтрального жиру не фарбуються.

- диференціація кристалів та глибок жирних кислот від мил.

Підігрів нативного незабарвленого препарату призводить до сплавлення в краплі кристалів і глибок жирних кислот. Глибоки та кристали мил у краплі не сплавляються.

- Виявлення мил.

Під впливом оцтової кислоти мила розщеплюються зі звільненням жирних кислот, які під час нагрівання плавляться, утворюючи краплі.

- Виявлення крохмалю та йодофільної флори.

Розчин Люголя забарвлює крохмаль, залежно від стадії його перетравлення в синювато-чорний, фіолетовий або червоно-бурий колір. Йодофільна флора нормальна і патологічна забарвлюється йодом у чорний або коричневий колір за рахунок гранульози, що міститься внутрішньоклітинно. Цисти найпростіших забарвлюються у жовтий колір.

- Виявлення яєць гельмінтів.

Гліцерин «просвітлює» препарат, очищаючи від бактерій та калового детриту яйця гельмінтів.

Такі елементи калу, як м'язові волокна, рослинну клітковину, лейкоцити, еритроцити, кишковий епітелій, слиз, яйця гільмінтів, найпростіші, що паразитують в кишечнику, мікроорганізми, кристали та ін. можна виявити шляхом мікроскопування нативного незабарвленого препарату.

2.2. Склад набору

Бензидин - 1 флакон (1,0 г).

Оцтова кислота, 50% - 1 флакон (100 мл).

Гідроперит, – 2 упаковки (4,5 гр).

Цинк оцтовокислий – 1 флакон (100 мл).

Розчин Люголя – 1 флакон (50мл).

Реактив Фуше – 1 флакон (100мл).

Оцтова кислота, 30% - 1 флакон (100 мл).

Судан III - 1 флакон (100 мл).

Метиленовий синій– 1 флакон (20мл).

Гліцерин – 1 флакон (130 г).

3. Аналітичні та діагностичні характеристики набору

Визначення прихованої крові.

Норма: реакція на кров негативна.

Визначення стеркобіліну

Норма: 40-280 мг/добу

Визначення білірубіну

Норма: виявляється лише до 3-х місячного віку.

4. Запобіжні заходи при роботі з набором

До складу набору входять бензидин, оцтова та трихлороцтова кислоти, судан III, метиленовий синій. При роботі з ними слід бути обережними і не допускати попадання на шкіру і слизові; при попаданні негайно промити уражене місце великою кількістю проточної води. При ковтанні слід випити 0,5 л теплої води та викликати блювоту.

При роботі з набором слід надягати одноразові гумові або пластикові рукавички.

5. Обладнання, матеріали та реагенти:

- Флакон із темного скла місткістю 10 мл;

- піпетка, що дозволяє відбирати 5 мл;

- колби конічні з притертою пробкою місткістю 100 мл;

- колба мірна місткістю 200 мл;

-циліндр мірний місткістю 100 мл;

- кювета емальована чи біла керамічна плитка;

- піпетки очні;

- палички скляні;

- скла предметні;

- скла покривні;

- пробірки хімічні скляні місткістю 10 мл;

- папір фільтрувальний лабораторний;

- лійки хімічні;

- ступка фарфорова з маточкою;

-пробірки центрифужні;

- Мікроскоп;

- секундомір;

- спиртування;

- вода дистильована;

- розчин хлористого натрію 154 ммоль/л;

-Рукавички гумові або пластикові.

6. Аналізовані проби

Кал, емульсія калу

Приготування емульсії калу (при щільній або неоднорідній консистенції калових мас)

Шматок калу поміщають у фарфорову ступку і розтирають у невеликій кількості дистильованої води або розчину натрію хлориду 154 ммоль/л до консистенції рідкої кашки. Можна скористатися центрифужною пробіркою та скляною паличкою.

7. Проведення аналізу

7.1. Приготування робочих розчинів реагентів

7.1.1. Приготування розчину бензидину.

Близько 0,05 г бензидину (на кінчику шпателя) внести у флакон із темного скла місткістю 10 мл, додати 5 мл розчину оцтової кислоти, 50 % і ретельно перемішати до повного розчинення.

Розчин бензидину готують безпосередньо перед застосуванням; зберігання не підлягає.

7.1.2. Приготування розчину перекису водню, 3%.

У колбу конічну місткістю 100 мл внести 4,5 г гідропериту, додати 50 мл дистильованої води і ретельно перемішати до повного розчинення.

Розчин перекису водню можна зберігати за температури (2-8)С у захищеному від світла місці трохи більше 3 місяців.

7.1.3. Цинк оцтовокислий.

Готовий до застосування. Перед застосуванням збовтати. Після розкриття флакона розчин можна зберігати за кімнатної температури (18-25)С у щільно закритому флаконі не більше 1 року.

7.1.4. Приготування робочого розчину Люголю

Розчин Люголя розбавити дистильованою водою у співвідношенні 1:1.

Робочий розчин Люголя можна зберігати за кімнатної температури в захищеному від світла місці не більше 6 місяців.

7.1.5. Реактив Фуше

Готовий до застосування. Перед застосуванням збовтати.

Після розкриття флакона розчин можна зберігати при кімнатній температурі щільно закритому флаконі не більше 1 року.

7.1.6. Судан III

Готовий до застосування. Перед застосуванням збовтати.

Після розкриття флакона розчин можна зберігати при кімнатній температурі щільно закритому флаконі не більше 1 року.

7.1.7. Приготування метиленового розчину синього.

Розчин метиленового синього розбавити дистильованою водою у співвідношенні 1:3.

Розчин метиленового синього,  можна зберігати при кімнатній температурі щільно закритому флаконі не більше 1 року.

7.1.8. Гліцерин

Готовий до застосування.

Після розкриття флакона можна зберігати за кімнатної температури (18-25)С у щільно закритому флаконі не більше 1 року.

7.2. Проведення аналізу

7.2.1. Визначення прихованої крові

Кал скляною паличкою нанести у вигляді мазка на предметне скло (або взяти 2-3 краплі емульсії калу). Скло з нанесеним матеріалом помістити в емальовану білу кювету або на білу керамічну плитку.

До препарату додати 2-3 краплі розчину бензидину та 2-3 краплі розчину перекису водню, 3% і перемішати скляною паличкою.

7.2.2. Визначення стеркобіліну

Емульсію калу внести в пробірку в кількості 1,0-2,0 мл, додати рівну кількість (попередньо збовтаного)  розчину оцтовокислого цинку та 1 краплю робочого розчину Люголю. Отриману суміш профільтрувати у скляну пробірку.

7.2.3. Визначення білірубіну

Емульсію калу налити по 1,0-2 мл у 2 пробірки (досвід та контроль). У дослідну пробірку додати по краплях реактив Фуше (об'єм реактиву, що додається, не повинен бути більше обсягу емульсії калу).

Примітка. Під час проведення аналізу обидві пробірки тримати у руці. Порівнювати забарвлення в дослідній пробірці з контрольною в світлі, що проходить.

7.2.4. Мікроскопічне дослідження

Для мікроскопічного дослідження калу готують 6 препаратів:

  - нативний незабарвлений препарат;

  - препарат із суданом III;

  - препарат з метиленовим синім;

  - препарат із 30% розчином оцтової кислоти;

  - препарат із розчином Люголя;

  - препарат з гліцерином.

При приготуванні кожного з них на предметне скло скляною паличкою наносять 1-2 краплі емульсії калу або рідкої калової маси, препарати 2-6 вносять по 1-2 краплі відповідного реактиву. При цьому краплю емульсії краєм покривного скла змішують із краплею реактиву, потім покривають покривним склом і розглядають спочатку під малим (8х10), а потім під великим (40х10) збільшенням.

При неоднорідності калових мас препарати слід готувати з макроскопічно видимих щільних частинок та рідкої частини.

8. Реєстрація результатів

При визначенні прихованої крові, стеркобіліну, білірубіну результат реєструють візуально. Під час мікроскопічного дослідження результат реєструють візуально, за допомогою мікроскопа.

9. Облік результатів

9.1 Визначення прихованої крові

Поява зеленого, синьо-зеленого або синього фарбування протягом перших 2 хвилин після змішування реагентів свідчить про наявність у калі крові (позитивна реакція). Поява забарвлення пізніший час не враховується (негативна реакція).

9.2. Визначення стеркобіліну

За наявності стеркобіліну (позитивна реакція) фільтрат дає зелену флюоресценцію, яка видно на темному тлі.

9.3. Визначення білірубіну

У присутності білірубіну утворюється зелене або зелене фарбування (позитивна реакція).

9.4. Мікроскопічне дослідження

Нативний незабарвлений препарат

У нативному препараті можна виявити більшість елементів калу: м'язові волокна (перетравлені, неперетравлені і слабоперетравлені), рослинну клітковину (перетравну і неперетравну) нейтральний жир у вигляді безбарвних крапель, жирні кислоти у вигляді крапель,