Основа агара для определения токсигенности дифтерийных микроорганизмов (ОТДМ)

Назначение:

Эта среда используется для определения токсигенности Corynebacterium diphtheriae.

Краткое описание и объяснение:

Corynebacterium diptheriae - палочковидные, неподвижные, неинкапсульовани, неспорообразующие, грамположительные бактерии. Этот организм также известный как дифтерийная палочка Клебса-Леффлера, потому что он был обнаружен в 1884 году немецкими бактериологами Edwin Klebs (1834-1912) и Friedrich Löffler (1852 - 1915). Corynebacterium diptheriae является патогеном человека; ее патогенность обусловлена ​​производством мощного экзотоксина, что действует на различные ткани, включая сердечную мышцу и периферические нервы. (1) Дифундирование токсина по культуре, засеянной штрихом, который является подозреваемым в Corynebacterium diptheriae, демонстрируется формированием белой линии преципитата, где токсин встречается с дифтерийными антитоксином, диффундирующего из полосок фильтровальной бумаги, встроенных в агар. In vitro токсигенность (вирулентность) Corynebacterium diptheriae была впервые описана Eleks. (2) Техника Eleks с использованием стандартизированного среды была улучшена King, Frobisher и Parsons. (3) Это среда дало результаты, соотносились с тестами, в которых использовалось прививки животных. Кроме того, было обнаружено, что протеозопептон стимулирует производство токсина в дополнение к поддержанию постоянства результатов. Hermann и др. (4) разработали обогатительную добавку без сыворотки для преодоления перебоев, с которыми столкнулись во время обогащения с использованием лошадиной, овечьей или кроличьей сыворотки. Эти обогатительные безсироваткови добавки состоят из кислотного гидролизата казеина, Твин 80 и глицерина. (5) При инкубировании инокулированных чашек линию преципитации наблюдают для токсигенных штаммов.

Принцип действия:

Основа агара для определения токсигенности дифтерийных микроорганизмов содержит протеозопептон, который является источником углерода и азота, необходимых для роста широкого спектра организмов, а также для производства токсина. Хлорид натрия поддерживает осмотическое равновесие среды. Теллурит калия ингибирует большинство грамотрицательных бактерий, исключая виды Corynebacterium, Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius и энтерококки. Staphylococcus epidermidis может давать рост на этой среде.

Средства предостережение:

1. Только для лабораторного использования.

2. раздражитель. Может раздражать глаза, кожу и респираторные органы.

Приготовление:

1. Растворите 37,5 г среды в 1000 мл дистиллированной воды.

2. Подогреть, если необходимо, до полного растворения среды с частом помешивании, чтобы избежать пригорания.

3. автоклавировать в течение 15 мин. при 121оС 1,1 атм.

4. Охладить до 55-60оС.

5. Асептически добавить 2 мл питательной добавки для определения токсигенности дифтерийных бактерий (MS145) и 0,5 мл стерильного 1% теллурита калия (MS024) в чашку Петри диаметром 100 мм и быстро добавить 10 мл стерильной основы агара для определения токсигенности дифтерийных микробов.

6. Перед затвердеванием среды по диаметру чашки поместить полоску фильтровальной бумаги, пропитанную мощным дифтерийными антитоксином. Позволить полоске опуститься на дно чашки.

7. Засеять чашку большим количеством инокулюма поперек полоски.

Контроль качества:

 Культуральные свойства:

Культуральные свойства наблюдаются с добавлением питательной добавки для определения токсигенности дифтерийных бактерий (MS145) и 0,5 мл стерильного 1% теллурита калия (MS024) после инкубирования при 35-37 ° С в течение 24-72 ч.