Основа агару для визначення токсигенності дифтерійних мікроорганізмів (DM1067)

Призначення:

Це середовище використовується для визначення токсигенності Corynebacterium diphtheriae.

Короткий опис та пояснення:

Corynebacterium diptheriae - паличкоподібні, нерухомі, неінкапсульовані, неспороутворюючі, грампозитивні бактерії. Цей організм також відомий як дифтерійна паличка Клебса-Леффлера, бо він був виявлений в 1884 році німецькими бактеріологами Edwin Klebs (1834-1912) і Friedrich Löffler (1852 - 1915). Corynebacterium diptheriae є патогеном людини; її патогенність обумовлена виробництвом потужного екзотоксину, що діє на різні тканини, включаючи серцевий м'яз і периферичні нерви.(1) Дифундування токсину з культури, засіяної штрихом, яка є підозрюваною на Corynebacterium diptheriae, демонструється формуванням білої лінії преципітату, де токсин зустрічається з дифтерійним антитоксином, що дифундує зі смужок фільтрувального паперу, вбудованих в агар. In vitro токсигенность (вірулентність) Corynebacterium diptheriae була вперше описана Eleks. (2) Техніка Eleks з використанням стандартизованого середовища була покращена King, Frobisher і Parsons. (3) Це середовище дало результати, що співвідносились з тестами, в яких використовувалось щеплення тварин. Крім того, було виявлено, що протеозопептон стимулює виробництво токсину на додаток до підтримання постійності результатів. Hermann та ін.(4) розробили збагачувальну добавку без сироватки для подолання перебоїв, з якими зіткнулися під час збагачування з використанням кінської, овечої або кролячої сироваток. Ці збагачувальні безсироваткові добавки складаються з кислотного гідролізату казеїну, Твін 80 і гліцерину.(5) При інкубуванні інокульованих чашок лінію преципітації спостерігають для токсигенних штамів.

Принцип дії:

Основа агару для визначення токсигенності дифтерійних мікроорганізмів містить протеозопептон, який є джерелом вуглецю та азоту, необхідних для росту широкого спектра організмів, а також для виробництва токсину. Хлорид натрію підтримує осмотичну рівновагу середовища. Телурит калію інгібує більшість грамнегативних бактерій, виключаючи види Corynebacterium, Streptococcus mitis, Streptococcus salivarius і ентерококи. Staphylococcus epidermidis може давати ріст на цьому середовищі.

Формула \ Літр

Засоби застереження:

1.   Тільки для лабораторного використовування.

2.   ПОДРАЗНЮВАЧ. Може подразнювати очі, шкіру та респіраторні органи.

Приготування:

1.   Розчиніть 37,5 г середовища в 1000 мл дистильованої води.

2.   Підігріти, якщо необхідно, до повного розчинення середовища з частим помішуванням, щоб запобігти пригоранню.

3.   Автоклавувати протягом 15 хв. при 121^оС 1,1 атм.

4.   Охолодити до 55-60^оС.

5.   Асептично додати 2 мл поживної добавки для визначення токсигенності дифтерійних бактерій (MS145) і 0,5 мл стерильного 1% телуриту калію (MS024) в чашку Петрі діаметром 100 мм и швидко додати 10 мл стерильної основи агару для визначення токсигенності дифтерійних мікроорганізмів.

6.   Перед застиганням середовища по діаметру чашки помістити смужку фільтрувального паперу, просочену потужним дифтерійним антитоксином. Дозволити смужці опуститися на дно чашки.

7.   Засіяти чашку великою кількістю інокулюму впоперек смужки.