Основа агара для идентификации листерий (PALCAM) (DM932) Палкам агар

Назначение:

Основа агара для идентификации листерий (PALCAM) (DM932) рекомендуют для селективного выделения и идентификации листерий.

Краткое описание и объяснение:

Род Listeria включает Listeria monocytogenes, Listeria ivanovii, Listeria seeligeri, Listeria welshimerii, Listeria innocua, Listeria grayi, Listeria murrayi и Listeria denitrificans. Среди них Listeria monocytogenes и Listeria ivanovii связанные с заболеваниями у людей. Патогенность Listeria ivanovii неопределенно. Listeria monocytogenes находят в широком диапазоне местообитаний, в том числе нормальной микрофлоре здоровых жвачных, желудочно-кишечном тракте бессимптомные людей и экологических источниках, включая речную воду, сточные воды, почву, силос, удобрения и растительность диван. (1)

Агар для идентификации листерий, известный также как Полимиксин-акрифлавина-Литий-Хлорид-Цефтазидим-Эскулин-маннит (PALCAM), был сформулирован Van Netten и др. (2) и рекомендуется для выделения Listeria monocytogenes из образцов продуктов питания. PALCAM среду широко рекомендуется для использования в выявлении L.monocytogenes в пищевых продуктах, (3-8) молоке и молочных продуктах, (9) и пробах из окружающей среды. (5) PALCAM среда имеет высокую избирательность в связи с наличием лития хлорида, цефтазидима, полимиксина и гидрохлорида акрифлавина. PALCAM среда является дифференциально-диагностическим с использованием таких двух систем показателей, как эскулин и цитрат железа и манит и феноловый красный.

Принцип действия:

Основа агара для идентификации листерий содержит пептический перевар животной ткани, служит основным источником питательных веществ для микроорганизмов. Глюкоза, крахмал и манит есть углеводородами и энергетическими источниками. Хлористый натрий поддерживает осмотическое равновесие среды. Феноловый красный - индикатор рН, который демонстрирует изменения в рН среды.

Селективность среды достигается за счет присутствия хлорида лития, сульфата полимиксина B и акрифлавина гидрохлорида, и цефтазидима, предусмотренного PALCAM антимикробной добавкой. Эти агенты эффективно подавляют рост наиболее часто встречающихся бактерий, кроме листерий, присутствующих в пищевых продуктах. Дифференциация на PALCAM среде основана на гидролизе эскулина и ферментации маннита. Все листерии гидролизуют эскулин, о чем свидетельствует почернение среды. Это почернение является результатом формирования 6,7 дигидроксикумарину, который реагирует с ионами трехвалентного железа, которые присутствуют в среде в виде трехвалентного железа аммонийного цитрата. В некоторых случаях на этой среде кроме Listeria, могут расти другие организмы, такие как стафилококки или энтерококки. Манит и индикатор рН, феноловый красный, добавляются для распознавания манитферментуючих штаммов Listeria. Ферментация маннита сказывается изменением цвета колонии и / или окружающей среды из красного или серого до желтого через производство кислых конечных продуктов.

Яичный желток (2,5% об / об) в PALCAM агар добавляют, чтобы помочь восстановлению поврежденных клеток. Добавление крови в PALCAM агар позволяет дифференцировать и подсчитать гемолитические виды Listeria.

Формула \ Літр

Приготовление:

1. Размешать 34,44 г сухой среды в 1000 мл дистиллированной воды.

2. Нагреть если необходимо до полного растворения частиц.

3. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 ат (121 ° С) в течение 15 минут.

4. Охладить до 50оС и асептически добавить регидратированных содержимое 1 флакона селективной добавки для листерий (PALCAM) (MS070).

5. Тщательно перемешать и разлить в стерильные чашки Петри.

Процедура тестирования:

1. Обратиться к соответствующей литературе и соблюдать требования стандартных методов.

2. инокулировать штрихами инкубированных на бульоне для обогащения образец или долю экранированного образца питания на PALCAM среду.

3. В зависимости от типа используемого образца, перед посевом на PALCAM агар следует использовать бульон для селективного обогащения.

4. Как правило среду для селективного обогащения Listeria используется для молочных про-дуктов; среда для селективного обогащения листерий UVM (DM521), бульон Фрайзера для вторичного обогащения (DM1293) используются для мяса и птицы.

5. Чашки инкубируют при 35 ° С в течение 24-48 часов в аэробных или микроаэрофильным условиях в пере-вернут положении (агар стороной вверх).

Результаты

1. Образуются серо-зеленые с черным центром и черным ореолом колонии Listeria; при гидролизе Listeria monocytogenes эскулина к эскулетин, последний вступает в реакцию с аммонийным цитратом железа, формируя черно-коричневый комплекс, наблюдается как черный ореол вокруг колоний.

2. Подтверждение Listeria делается следующим пересевом на соответствующие среды и Биохим-ческий / серологическими тестами.

3. Манитферментуючи организмы, такие как стафилококки, могут расти на этой среде, образуя желтые с желтым ореолом колонии.