Сифилис RPR -тест

1. НАЗНАЧЕНИЕ

Для серодиагностики сифилиса и контроля результатов его лечения.

2. ХАРАКТЕРИСТИКА НАБОРА

2.1. Принцип действия

Тест основан на взаимодействии кардиолипинового антигена с соответствующими антителами (реагинами) в сыворотке или плазме больного сифилисом. Для усиления видимых различий между положительным и отрицательным результатом реакции к антигену добавлены угольные частицы. При наличии в пробе реагинов образуются черные агрегаты, видимые невооруженным глазом. В отсутствие реагинов флоккуляция не происходит, и угольная суспензия сохраняет однородность.

2.2. Состав набора

Реагент 1- RPR-антиген – водная 0,02 % суспензия угольных частиц сенсибилизированных смесью холестерина, кардиолипина, лецитина; однородная суспензия от серого до черного цвета, при хранении разделяющаяся на черный осадок и прозрачную бесцветную надосадочную жидкость.

Реагент 2- положительная контрольная сыворотка (К⁺) –  инактивированная, содержит антитела к кардиолипиновому антигену в титре не ниже 1:4 (титр указывается в паспорте каждой серии); прозрачная бесцветная или светло-желтая жидкость.

Реагент 3- отрицательная контрольная сыворотка (К^-) – инактивированная; прозрачная бесцветная или светло-желтая жидкость.

В комплект поставки входят также карточки для реакции.

Набор выпускается в двух вариантах комплектации:

комплект № 1 (рассчитан на 100 определений);

комплект № 2 (рассчитан на 500 определений).

3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

Набор рассчитан на проведение 100 или 500 определений, включая контрольные образцы.

4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Набор биологически безопасен, однако с исследуемыми образцами следует обращаться как с потенциально инфицированными материалами.

5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

- Шейкер орбитальный (любой марки с амплитудой колебаний 10-20 мм).

- Микропипетка автоматическая, с наконечниками на 50 мкл.

- Физиологический раствор - 0,9 % раствор натрия хлористого  в воде очищенной (дистиллированной или деионизированной).

6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Нативная или прогретая сыворотка или плазма. Нельзя использовать гемолизированные, хилезные или проросшие образцы. Сыворотки, предназначенные для исследования, могут храниться до 7 сут при температуре 2-8^оС или до 3 мес. при температуре минус 20^оС.

7. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

7.1. Подготовка исследуемых образцов

Все реагенты до начала анализа выдерживают 15-20 мин при комнатной температуре.

Суспензию RPR-антигена взбалтывают до однородного состояния.

7.2. Проведение анализа

Качественное определение

1. Микропипеткой нанести  по 50 мкл (по одной капле) К+, К- и исследуемых образцов на ячейки одноразовой карточки (одна ячейка на образец). Распределить жидкость по всей поверхности ячейки наконечником микропипетки. Для каждого образца использовать отдельный наконечник.

При работе с карточками нельзя прикасаться пальцами к ячейкам!

2. Нанести на все ячейки по 20 мкл RPR антигена. Карточки поместить на платформу орбитального шейкера и вращать в горизонтальной плоскости 8 мин со скоростью 180 об/мин. Сразу же после этого произвести учет результатов.

Исследование К+ и К- необходимо проводить с каждой серией исследуемых образцов.

Полуколичественное определение (определение титра)

Проводится только с образцами, давшими положительную реакцию.

1. Приготовить на одноразовых карточках серийные двукратные разведения исследуемых образцов и К+ – от 1:2 до 1:1024. Использовать отдельную карточку для каждого образца.

При работе с карточками нельзя прикасаться пальцами к ячейкам!

Нанести по 50 мкл (по одной капле) физиологического раствора на все тестовые ячейки. Затем в ячейку № 1 первой карточки добавить 50 мкл (одну каплю) первого исследуемого образца и перемешать с физиологическим раствором. После этого отобрать из ячейки № 1 50 мкл (одну каплю) разведенного 1:2 образца, перенести в ячейку № 2 и перемешать. Повторить процедуру до получения последнего разведения (1:1024) в ячейке № 10. Используя наконечник микропипетки, распределить капли по всей поверхности ячеек, двигаясь от большего разведения к меньшему.

Нанести на все ячейки по 20 мкл RPR-антигена. Поместить карточки на платформу орбитального ротатора и вращать в горизонтальной плоскости 8 мин при 180 об/мин. Сразу же после этого произвести учет результатов, начиная с К⁺.

Неиспользованные реагенты после первого вскрытия упаковок допускается хранить в плотно укупоренных флаконах при температуре  от 2 до 8 ^оС до истечения срока годности набора.

Вскрытые пакеты с карточками хранить при комнатной температуре.

 8. РЕГИСТРАЦИЯ И УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ

Качественное определение

Положительная реакция                 –  в пробе видны большие, средние или мелкие агрегаты.

Отрицательная реакция                 –  видимые агрегаты в пробе отсутствуют.

Примечание: Наличие в пробе после реакции разводов или неравномерности окраски при отсутствии видимых агрегатов не является признаком положительной реакции

Полуколичественное определение

Результаты титрования учитывают также как при качественном определении.

Титром антител к RPR-антигену в образце считается последнее разведение, в котором получена положительная реакция (различаются видимые агрегаты).

Титр антител в исследуемом образце учитывают при условии, что титр антител в К⁺, полученный в реакции, отличается от значения, указанного в паспорте, не более чем на одно разведение.

Примечание: Наличие реагинов (антител к кардиолипину) в сыворотке или плазме человека может иметь место помимо сифилиса также при ряде других заболеваний и физиологических состояний организма, таких как инфекционный мононуклеоз, беременность, вирусная пневмония, системная красная волчанка, ревматоидный артрит, малярия, лепра и др. В связи с этим все положительные результаты, полученные с помощью набора "Сифилис RPR-тест", должны быть подтверждены с помощью наборов специфическими методами исследования, использующими трепонемный антиген (рекомендуется использовать "Сифилис-РПГА-тест" или соответствующие иммуноферментные тест-системы).

9. СРОК ГОДНОСТИ. УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ТРАНСПОРТИРОВКИ

Срок годности набора – 2 года.

Набор должен храниться в упаковке предприятия-изготовителя при температуре от 2 до 8 ^оС. Замораживание не допускается.