Швидкий тест на сифіліс є надійним імуноферментним абсорбентом на твердій основі для якісного визначення антитіл( IgG, IgM, IgA) проти Treponema Pallidum, які утворюються у сироватці крові людини або плазмі. Призначений для професійного використання при допомозі у діагностиці блідої спірохети. Тест повинні бути підтверджені альтернативними методом досліджень та клінічними даними.

Швидкий тест на сифіліс є композицією двох ключових компонентів:

1) Основа з мікролунками  покрита рекомбінантним Тр антигеном

2) Рідкий кон`югат, що є композицією кон`югованого з кінською червонуватою пероксидазою пероксидазою Тр антигену (HPR-Тр кон`югат).

Під час дослідження зразок і HPR-Тр кон`югат одночасно інкубується у покритих мікропланшетах.   Антитіла ( IgG, IgM, IgA) і Тр,присутні у зразку,  реагують  з Тр антигеном, яким покриті лунки, і утворюється сендвич комплекс кон`югат Не зв`язаний кон`югат видаляється при вимиванні. Утворений з кон`югатом комплекс приймає блакитний колір при додатковій інкубації з ТМВ субстратом. Реакція припиняється з Стоп Розчином і абсорбат зчитують на спектрофотометрі при 450/620-690 нм.

Збір та приготування зразків

·      ·          Сироватка і плазми повинні бути приготування з цільної крові, що взята за допомогою техніки венопунктури.

·          Цей набор вже готовий для роботи з сироваткою і плазмою і не потребує додаткових дій.

·          Якщо зразок не потрібно досліджувати негайно, потрібно заморозити при 2-8ºС. Якщо очікується, що дослідження будуть проведенні довше ніж за три дні, зразок повинен бути заморожений  (-20ºС). Видалити конденсат, що з`явився при відтаюванні. Якщо зразок повинен бути транспортований, запакувати у рекомендовану федеральними регуляторними службами упаковку для транспортування відповідним способом.

·          Зразки, можуть містити преципітат, що є несумісним з результатами аналізу. Такі зразки треба очистити за допомогою центрифугування.

·        Не використовувати зразки плазми з великою ліпемією, дуже гемолізовані і мутні. Не використовувати зразки, що містять азид натрію.

Процедура аналізу

1.         Взяти необхідну кількість лунок у смужці і закрі-пити у мікропланшетному каркасі . Відкласти невикористані смужки.

2.         Усі зразки додавати відповідно до позначок у ІФА тестсистеми Робочій Панелі

2.1         Пусті лунки. Повинні залишатись пустими. Не додавати жодних реагентів.

2.2         Контрольні  лунки. Додати  50µL Сифіліс Ab Позитивного, Сифіліс Ab Негативного Контролю відповідно у визначені контрольні лунки

2.3         Тестові лунки. Додати  50µL відповідно у кожну тестову лунку.

3.         Додати  50µL HPR-Тр кон`югат розчину в кожну лунку, але не в пусті лунки.

4.         Ніжно струсити лунки 20 секунд для рівномірного покриття лунок.

5.         Інкубують лунки при 37ºС 60 хвилин.

6.         Ретельно видаляють інкубовану суміш у пустий контейнер. Заповнюють кожну лунку розчиненим миючим буфером і обережно перемішують 20-30 секунд. Ретельно видаляють миючий розчин і переносять на планшету з абсорбуючим папіром. Повторюють процедуру більше 4 разів.

7.         Вимокують лунки плівкою з чистячім папіром для видалення надлиш-ків миючого розчину.

8.         Додають 50µL (або 1 краплю) ТМВ субстрату А і 50µL (або 1 краплю) ТМВ субстрату В у кожну лунку.

9.         Інкубують  при 37ºС у темряві 10 хвилин.

10.       Зупиняють реакцію додаючи 50µL (або 1 краплю) стоп буферу у кожну лунку. Обережно перемішують протягом 30 секунд. Дуже важливо досягти того, щоб блакитний колір повністю змінився на жовтий.

11.        Досліджують у мікропланшетному рідері при довжині хвилі 450 нм вимірюючи всмоктуваність кожної лунки проти пустих лунок протягом 15 хвилин після додавання Стоп Розчину. Використовують фільтр 620-690 нм,  як референтну довжину хвилі для оптимізації результату аналізу.