Питательная среда для определения токсигенности дифтерийных микробов сухая (Коринетоксагар)

1. НАЗНАЧЕНИЕ

«Коринетоксагар» предназначен для определения токсигенности дифтерийных микробов при диагностике инфекционных заболеваний «in vitro».

2. ХАРАКТЕРИСТРИКА НАБОРА

«Коринетоксагар» представляет собой смесь сухих компонентов в виде мелкодисперс-ного гигроскопичного порошка светло-желтого цвета.

Выпускается в полиэтиленовых банках по 250 г.

2.1. ПРИНЦИП ДЕЙСТВИЯ

Совокупность компонентов, входящих в состав набора, обеспечивает питательные потребности для роста всех видов коринебактерий и продуцирование токсина токсигенными штаммами.

В основе метода определения токсигенности коринебактерий дифтерии лежит процесс встречной иммунодиффузии токсина и антитоксических антител в плотной питательной среде. В местах оптимального количественного соотношения между токсином, продуцируемом кори-небактериями и антитоксином, нанесенным на фильтровальную бумагу, происходит их взаимодействие с образованием преципитата в виде белой линии или «усов».

2.2. СОСТАВ НАБОРА

«Коринетоксагар» представляет собой смесь сухих компонентов из расчета, г/л:

Панкреатический гидролизат минтая ……………… 20,0 

Натрия хлорид ……...............................................…... 5,0 

Натрия карбонат.......................................................….. 0,6-0,1

Агар микробиологический ………………………….. 10,0±3,0

3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

 «Коринетоксагар» обеспечивает на всех засеянных чашках Петри рост всех типов кори-небактерий и образование токсина токсигенными тест-штаммами Corynebacterium diphtheriae gravis 665, Corynebacterium diphtheriae mitis 6765 и Corynebacterium diphtheriae intermedius 619, проявляющееся в образовании линий преципитации через 22-24 ч инкубации при температуре (37±1) С при просмотре посевов с лупой в проходящем свете, на темном фоне. Через 44-48 ч инкубации при температуре (37±1) С линии преципитации становятся компактнее и должны быть видны невооруженным глазом.

Рост нетоксигенных штаммов Corynebacterium diphtheriae gravis nontoxigenic 4895, Corynebacterium diphtheriae mitis nontoxigenic 3689 и Corynebacterium diphtheriae intermedius nontoxigenic 7227 на всех засеянных чашках не сопровождается образованием линий преципи-тации.

4. МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ

Соблюдение «Правил устройства, техники безопасности, производственной санитарии, противоэпидемического режима и личной гигиены при работе в лабораториях (отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологических учреждений системы Министерства здраво-охранения» (Москва, 1981 г.).

5. ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ

• Термостат обеспечивающий температуру 37±1 ºС 

• Весы лабораторные 2 класса точности

• Автоклав 

• Пробирки стеклянные вместимостью – 10 мл

• Пипетки стеклянные позволяющие отбирать объемы жидкости 1 и 2 мл

• Цилиндр стеклянный мерный вместимостью 1000 мл

• Чашки Петри стерильные

• Вода дистиллированная

• Колбы

• Воронки стеклянные

6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

Объекты исследований в санитарной и клинической микробиологии.

7. ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ

Приготовление «Коринетоксагара».

Препарат в количестве, указанном на этикетке для приготовления конкретной серии пи-тательной среды, размешивают в 1 л дистиллированной воды, кипятят 3 мин до полного рас-плавления агара. Среду разливают в стерильные флаконы мерно, стерилизуют автоклавирова-нием при температуре 110 ºС в течение 30 мин. После автоклавирования  и охлаждения до 45-50 ºС добавляют 20 % сыворотки крови крупного рогатого скота  или сыворотки лошадиной нормальной, перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри.

Готовая среда в чашках Петри прозрачная, желтого цвета.

До внесения  сыворотки среду можно использовать в течение 14 суток при температуре хранения 2-8 ºС. Среду с сывороткой можно использовать в течение 5 суток при температуре хранения 2-8 ºС.

Приготовление бумажных полосок.

Полоски фильтровальной бумаги размером 80х15 мм заворачивают в бумажные пакетики  по 3 штуки и стерилизуют автоклавированием при температуре 120  ºС в течение 30 мин. Бумажные полоски стерильным пинцетом помещают в стерильную чашку Петри и смачивают дифтерийным антитоксином, предварительно растворенным в 1 мл стерильной дистиллированной воды или стерильного 0,9 % раствора натрия хлорида (на смачивание одной бумажной полоски идет 0,25 мл раствора дифтерийного антитоксина). Смоченную бумажку стерильным пинцетом переносят на поверхность питательной среды в чашку Петри. Чашки подсушивают в открытом виде вверх дном в термостате при температуре (37±1) ºС в течение 15-20 мин.